于晓虹　史锋　邵靖宇 
-----------------------------摘要略
在以往的研究中发现许多有毒蛇血清中含有天然解毒因子，可中和其自身毒液中毒素，并证明，这些解毒因子属于蛋白质，且解毒过程不属于抗原抗体结合的免疫反应，但其作用机理多数尚在探讨中〔1～4〕。为此，我们对几种无毒蛇血清进行研究，希望找到能对抗多种蛇毒的有效因子。 
1　材料 
1.1　无毒蛇血清　采自浙江的黑眉锦蛇(Elaphe carinta)、乌梢蛇(Zaocy dhumnades)、王锦蛇(Elaphe teaniura)的血清。 
1.2　蛇毒冻干粉　采自浙江山区的眼镜蛇(Naja naja atra)、短尾蝮蛇(Gloydius brevicaudus)、五步蛇(Dienagkistrodon acutus)、竹叶青蛇(Trimeresurus stejnegeri)的蛇毒冻干粉，于-20℃保存。 
1.3　实验动物　NIH雄性小鼠(浙江大学医学院动物房)。 
2　方法 
2.1　蛇毒近似LD50测定　按Meier等方法〔5〕，取8～12只，18～22 g雄性NIH小鼠，随机编号后，用配成一系列浓度的蛇毒以10 ml/kg量进行腹腔注射，记录每只小鼠存活时间，以剂量与存活时间的比例为横坐标，剂量为纵坐标作图，直线回归后，纵坐标上的截距即为近似LD50值。 
2.2　无毒蛇血清采集及蛋白含量测定　将王锦蛇、乌梢蛇、黑眉锦蛇断尾取血，获得3种血清。动物实验之前，血清要经过58℃灭活处理。将采集的血清，用生理盐水稀释，紫外分光光度法测定血清蛋白含量。以牛血清白蛋白为标准蛋白，紫外280 nm测吸光值，做标准曲线。紫外280 nm测蛇血清的光吸收值，从标准曲线上查得蛋白含量。 
2.3　无毒蛇血清抗蛇毒实验　选取80只NIH雄性小鼠，体重18～22 g，随机分成4大组，分别进行血清对抗4种蛇毒实验，每一大组分成4小组，每小组5只小鼠。对照组仅注射某种蛇毒，实验I组注射蛇毒加王锦蛇血清，实验Ⅱ组注射蛇毒加乌梢蛇血清，实验Ⅲ组注射蛇毒加黑眉锦蛇血清。分别准确称取4种蛇毒，按上述实验所得LD50量，对照组用生理盐水稀释被测蛇毒，实验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别加入灭活的王锦蛇、乌梢蛇、黑眉锦蛇的血清。各小组小鼠，按10 ml/kg注射上述配好的溶液，观察生存时间。 
 
 2.4　乌梢蛇血清及王锦蛇血清对4种蛇毒的中和作用　取灭活的乌梢蛇血清及王锦蛇血清与4种蛇毒混合，37℃水浴30 min，再按上述近似LD50测定法进行测定，观察此2种无毒蛇血清对4种蛇毒的中和作用，以及随着血清量的变化，LD50的变化情况。 
3　结　果 
3.1　紫外分光光度法测定血清蛋白质含量　乌梢蛇血清蛋白含量为48 mg/ml，王锦蛇血清和黑眉锦蛇血清蛋白含量均为47 mg/ml。 
3.2　实验组与对照组的小鼠平均死亡时间　本实验结果显示：小鼠平均死亡时间，实验组与对照组比较，I组在抗蝮蛇毒时提高1.9倍，抗五步蛇毒时提高4.4倍，抗竹叶青蛇毒时提高2.7倍，而在抗眼镜蛇毒时仅提高了0.1倍；Ⅱ组在抗蝮蛇毒时提高1.6倍，抗五步蛇毒时提高4.2倍，抗竹叶青蛇毒时提高2.8倍，而在抗眼镜蛇毒时仅提高0.3倍；实验Ⅲ组对4种蛇毒无对抗作用(表1)。 
表1　实验组与对照组的小鼠平均 
死亡时间(min)